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- ¿Cómo funciona el sistema Flp In??
- ¿Cómo funciona FLP FRT??
- ¿Puedes transfectar células dos veces??
- ¿Qué son las líneas celulares estables??
- ¿Qué es una célula HEK??
- ¿La recombinación Cre es reversible??
- ¿Qué significa Cre en ratones??
- ¿Cómo se crea el ratón Cre??
- ¿Qué es Cre en ratones??
- ¿El suero inhibe la transfección??
- ¿Cuál es la diferencia entre electroporación y nucleofección??
- ¿FBS inhibe la transfección??
- ¿Por qué usamos células CHO??
- ¿Qué células se dividen continuamente??
- ¿Cuál es la diferencia entre transfección estable y transitoria??
¿Cómo funciona el sistema Flp In??
El sistema Flp-In™ agiliza la generación de líneas celulares de expresión de mamíferos estables aprovechando un sistema de recombinación de ADN derivado de Saccharomyces cerevisiae. ... En el sistema Flp-In™, se utilizan tres vectores diferentes para generar líneas de células de mamífero estables isogénicas que expresan sus genes de interés.
¿Cómo funciona FLP FRT??
La proteína Flp, al igual que Cre, es una recombinasa específica del sitio de la familia de las tirosinas. Esta familia de recombinasas realiza su función a través de un mecanismo de topoisomerasa tipo IB que provoca la recombinación de dos cadenas separadas de ADN. La recombinación se lleva a cabo mediante un proceso repetido de dos pasos.
¿Puedes transfectar células dos veces??
Sí, se puede transfectar, en principio. ... Entonces, cuando haya transfectado las células estables por segunda vez con el mismo plásmido, ¿observó algún aumento en la expresión del transgén o algún cambio en el número de copias de la expresión??
¿Qué son las líneas celulares estables??
Las líneas celulares estables son herramientas de laboratorio cruciales que se pueden utilizar para expresar grandes cantidades de una proteína de interés. ... Las líneas celulares se reproducen indefinidamente y continúan expresando el transgén de manera consistente durante ese período de tiempo.
¿Qué es una célula HEK??
De Wikipedia, la enciclopedia libre. Las células 293 de riñón embrionario humano, también conocidas como células HEK 293, HEK-293, 293, o menos precisamente como células HEK, son una línea celular inmortalizada específica derivada de un feto abortado o células de riñón embrionario humano cultivadas en cultivo de tejido tomado de un feto femenino en 1973.
¿La recombinación Cre es reversible??
Todos los eventos de recombinación mediados por FLP o Cre son reversibles. ... Debido a que la recombinación solo puede ocurrir entre sitios objetivo de la misma secuencia en vectores FLEx, la secuencia de ADN que debe invertirse está flanqueada por dos pares de sitios objetivo que difieren en su secuencia.
¿Qué significa Cre en ratones??
Se ha aplicado con éxito en levaduras, plantas, cultivos de células de mamíferos y ratones (Araki et al. 1987). Se basa en la capacidad del gen de la recombinasa (cre) de la recombinación de ciclación del bacteriófago P1 (Cre) para efectuar la recombinación entre pares de sitios loxP.
¿Cómo se crea el ratón Cre??
El sistema Cre-loxP es una poderosa tecnología ampliamente utilizada para la edición de genes de mamíferos. ... A continuación, se generan ratones knockout condicionales cruzando la cepa Cre-driver con una cepa de ratón floxed (Figura 1B). La especificidad y el momento de la recombinación están controlados por el promotor y/o potenciador utilizado.
¿Qué es Cre en ratones??
El sistema Cre/lox es una de las herramientas más potentes y versátiles desarrolladas para la genética del ratón. Brinda a los investigadores de ratones un control sofisticado sobre la ubicación y el momento de la expresión génica. Cre/lox generalmente se usa para hacer alelos knockout, pero también se puede usar para activar la expresión génica.
¿El suero inhibe la transfección??
La calidad del suero puede afectar significativamente el crecimiento celular y el resultado de la transfección. Por lo tanto, es importante controlar la variabilidad entre diferentes marcas o incluso diferentes lotes de suero para obtener los mejores resultados. Después de probar el suero en sus células, siga usando el mismo suero para evitar variaciones en su resultado.
¿Cuál es la diferencia entre electroporación y nucleofección??
Basada en el método físico de electroporación, la nucleofección utiliza una combinación de parámetros eléctricos, generados por un dispositivo llamado Nucleofector, con reactivos específicos del tipo de célula. ... En contraste, otros métodos de transfección no viral comúnmente utilizados se basan en la división celular para la transferencia de ADN al núcleo.
¿FBS inhibe la transfección??
El BSA contenido en el FBS bloqueará dos cosas, la agregación necesaria para que su reactivo con el ADN se sedimente y la carga positiva sobre estas partículas necesaria para ingresar a las células, lo que dificulta su eficiencia. ... La eficiencia de la transfección en este caso no se verá gravemente obstaculizada.
¿Por qué usamos células CHO??
Las células CHO se hicieron populares porque tienen un número bajo de cromosomas y se usaron para estudiar genética. ... Estas características han convertido a las células CHO en la línea celular más importante para la producción de proteínas terapéuticas, incluidos los anticuerpos humanizados.
¿Qué células se dividen continuamente??
Las células lábiles se dividen continuamente e incluyen células epiteliales superficiales, como células epiteliales escamosas estratificadas de la piel y células epiteliales columnares del tracto gastrointestinal.
¿Cuál es la diferencia entre transfección estable y transitoria??
En la transfección estable, el ADN del plásmido se integra con éxito en el genoma celular y se transmitirá a las generaciones futuras de la célula. Sin embargo, en la transfección transitoria, el material transfectado ingresa a la célula pero no se integra en el genoma celular.
